PEI(聚乙烯亞胺)轉染試劑是一種高效、低成本的非脂質體聚合物轉染試劑，廣泛應用于哺乳動物細胞、昆蟲細胞及部分植物細胞的DNA、siRNA等核酸的轉染。其配制步驟需嚴格遵循無菌操作，并注意濃度、pH值及儲存條件，以下是詳細的配制步驟及注意事項：
 

　　一、配制前準備
 

　　材料與試劑
 

　　PEI粉末(分子量通常為25 kDa或40 kDa，需根據(jù)實驗需求選擇)
 

　　超純水(或無內(nèi)毒素水)
 

　　1 M HCl(用于調節(jié)pH)
 

　　1 M NaOH(備用)
 

　　0.22 μm濾膜(無菌過濾用)
 

　　無菌離心管、移液器、磁力攪拌器(可選)
 

　　個人防護
 

　　佩戴實驗服、手套和護目鏡，避免直接接觸PEI粉末(可能刺激皮膚和呼吸道)。
 

　　二、配制步驟
 

　　1. 溶解PEI粉末
 

　　計算質量：根據(jù)目標濃度(常用1 mg/mL)和所需體積，計算PEI粉末質量。
 

　　示例：配制10 mL 1 mg/mL PEI溶液，需稱取10 mg PEI粉末。
 

　　溶解：將PEI粉末加入適量超純水(如5 mL)，渦旋或磁力攪拌至完全溶解(可加熱至50-60℃加速溶解，但需避免高溫破壞結構)。
 

　　定容：將溶解后的溶液轉移至容量瓶或離心管，用超純水定容至目標體積(如10 mL)。
 

　　2. 調節(jié)pH值
 

　　初始pH：PEI溶液初始pH通常較低(約1-2)，需用1 M HCl或NaOH調節(jié)至生理兼容范圍(pH 7.0-7.4)。
 

　　操作：
 

　　逐滴加入1 M NaOH，邊加邊攪拌，同時用pH試紙或pH計監(jiān)測，直至pH達7.0-7.4。
 

　　若pH過高，可用1 M HCl回調。
 

　　3. 無菌過濾
 

　　過濾：將調節(jié)好pH的PEI溶液通過0.22 μm濾膜無菌過濾，去除雜質和微生物。
 

　　注意：
 

　　過濾前需確保濾膜和過濾裝置無菌。
 

　　若溶液體積較大，可分次過濾或使用真空過濾裝置。
 

　　4. 分裝與儲存
 

　　分裝：將過濾后的PEI溶液按實驗需求分裝至無菌離心管(如1 mL/管)，避免反復凍融。
 

　　儲存：
 

　　短期使用(1-2周)：4℃保存。
 

　　長期保存：-20℃或-80℃冷凍，可穩(wěn)定數(shù)月至一年。
 

　　避免反復凍融：每次取用后立即放回冷凍環(huán)境。
 

　　三、關鍵注意事項
 

　　濃度優(yōu)化
 

　　PEI濃度需根據(jù)細胞類型和轉染效率優(yōu)化。常用范圍為1-10 μg/mL(按DNA質量計算)，但需通過預實驗確定最佳比例(如PEI:DNA質量比為1:1至6:1)。
 

　　pH敏感性
 

　　PEI的轉染效率受pH影響顯著。pH過低(<6.5)可能導致細胞毒性，pH過高(>7.5)可能降低轉染效率。
 

　　無菌操作
 

　　PEI溶液易受微生物污染，配制全過程需嚴格無菌，避免影響細胞活性。
 

　　內(nèi)毒素控制
 

　　若用于敏感細胞(如原代細胞或干細胞)，建議使用無內(nèi)毒素水配制，并檢測內(nèi)毒素水平(<0.1 EU/mL)。
 

　　避免金屬離子污染
 

　　PEI可能與金屬離子(如Ca²?、Mg²?)結合，影響轉染效率。配制時避免使用含金屬離子的試劑或容器。
 

　　四、預實驗建議
 

　　細胞兼容性測試：首次使用前，在目標細胞中測試PEI的細胞毒性(如MTT實驗)和轉染效率(如熒光報告基因)。
 

　　濃度梯度優(yōu)化：設置PEI濃度梯度(如1、2、4、6 μg/mL)，確定最佳轉染條件。
 

　　對照實驗：設置空白對照(無PEI)和陽性對照(已知高效轉染試劑)，驗證實驗可靠性。
 

　　五、PEI(聚乙烯亞胺)轉染試劑常見問題解決

 

　　轉染效率低：檢查PEI濃度、pH值、細胞狀態(tài)及DNA質量。
 

　　細胞毒性高：降低PEI濃度或縮短轉染時間，優(yōu)化轉染后培養(yǎng)條件(如更換新鮮培養(yǎng)基)。
 

　　溶液渾濁或沉淀：可能因pH不當或金屬離子污染導致，需重新配制并過濾。