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怎么處理牛血清白蛋白的常見問題
2020-03-25 牛血清白蛋白一般做為穩(wěn)定劑被用于限制酶或者修飾酶的保存溶液和反應液中，因為有些酶在低濃度下不穩(wěn)定或活性低。加入牛血清白蛋白后，它可能起到保護或載體作用，不少酶類添加牛血清白蛋白后能使其活性大幅度提高。對多數底物牛血清白蛋白而言，牛血清白蛋白可以使酶切更*，并可實現重復切割。在37℃，酶切反應超過1h時，牛血清白蛋白可以使酶更加穩(wěn)定，因為在不含牛血清白蛋白的反應緩沖液中，許多限制性內切酶在37℃下只能存活10"20min甚至更短的時間。而BSA可以結合緩沖液或底物DNA中抑制限...
蛋白酶K具有廣泛的底物特異性
2019-12-27 蛋白酶K具有廣泛的底物特異性。即便存在洗滌劑的情況下，其仍可降解許多非變性狀態(tài)的蛋白質。蛋白酶K分離自一種可在角質上生長的真菌白色側齒霉菌(Engyodontiumalbum)（前稱腐生真菌(Tritirachiumalbum)。因此，蛋白酶K能夠降解非變性狀態(tài)的角質（頭發(fā)），因而稱為“蛋白酶K”。1其切割的主要位點為帶有封閉氨基基團、鄰近脂族或芳香族氨基酸羧基端的肽鍵。因其廣泛的特異性，其較為常用。蛋白酶K（ProteinaseK），相對分子量約為29.3kDa,是一種切割...
如何提取外泌體？都有哪些方法？
2019-11-26 外泌體是指包含了復雜RNA和蛋白質的小膜泡(30-150nm)，現今，其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。1983年，外泌體于綿羊網織紅細胞中被發(fā)現，1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來源于細胞內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體，經多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中。所有培養(yǎng)的細胞類型均可分泌外泌體，且外泌體天然存在于體液中，包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關他們分泌和攝取及其組成、“運載...
如何解決胎牛血清使用中遇到的問題？
2019-11-15 如何儲存和解凍胎牛血清才不會使產品質量受損?將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。長時間儲存在2-8℃時，血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此，推薦在-20℃以下儲存血清，并避免反復凍融。我們建議血清應保存在-2O℃。若存放于4℃時，請勿超過一個月。若一次無法用完一瓶，建議無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內，再放回冷凍。按如下操作可避免沉...
PicoGreen熒光染料可對DNA樣品進行定量
2019-09-10 PicoGreen熒光染料法是一種靈敏的雙鏈DNA檢測方式，通過Modulus檢測儀可以檢測到pg級的微量DNA。這種方法主要用來測定微量的DNA殘留，或對DNA樣品進行定量。作為DNA染色劑之一的PicoGreen熒光染料特異性地與樣品中雙鏈DNA結合，產生熒光信號。PicoGreen技術可以檢測到低達0.5納克雙鏈DNA的變化。DNA的微量增加引起熒光信號強度或相對熒光單位（RFU）的顯著增加。其自發(fā)熒光忽略不計，重復性標準差異低，不受樣品化學成分的干擾。Picogree...
擦亮眼睛：選購胎牛血清要注意這些問題
2019-04-22 市場上的胎牛血清種類繁多，魚龍混雜，很多科研工作者，特別是剛接觸細胞培養(yǎng)的人，難以分辨胎牛血清質量的優(yōu)劣。選購胎牛血清請注意以下幾點：一、外觀拿到胎牛血清，先接觸的是血清外觀，對于缺少細胞培養(yǎng)經驗的人來說，外觀的判斷尤為重要1、顏色根據血紅蛋白含量的不同，胎牛血清可表現出黃色或紅色，我國的細胞培養(yǎng)用血清標準是不高于20mg/dl，實際上，血紅蛋白含量的高低對血清并無直接影響，這個指標的意義在于能體現出采血過程的嚴謹規(guī)范程度，良好的操作能降低血清的溶血。國產血清的采血點很分散，...
外泌體可以來了解一下
2018-12-07 外泌體的提取主要包括以下幾種方式，一是超速離心法，這是目前外泌體提取常用的方法。此種方法得到的外泌體量多，但是純度不足，電鏡鑒定時發(fā)現外泌體聚集成塊，由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標準，也有一些研究認為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過濾離心，這種操作簡單、省時，不影響外泌體的生物活性，但同樣存在純度不足的問題。三是密度梯度離心法，用此種方法分離到的外泌體純度高，但是前期準備工作繁雜，耗時，量少。四是免疫磁珠法，這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整，特異性高、操作簡單、不...
EZ ECL Femto化學發(fā)光液（飛克級）
2018-11-13 使用方法1)取出印記膜，加入合適的封閉液在溫室下孵育20-60分鐘，同時振蕩，以封閉膜上非特異性蛋白結合位點。2)將膜從封閉液中取出，與一抗工作液在溫室孵育1小時，同時振蕩；或在28℃孵育過夜，不振蕩。3)將足量的洗滌緩沖液加至膜上，保證緩沖液將膜*覆蓋。振蕩孵育≥5分鐘，更換洗滌緩沖液并重復該步驟4-6次。增加洗滌緩沖液體積，洗滌次數和洗滌時間有助于降低背景信號。注：1）孵育前，膜在洗滌緩沖液中的短暫淋洗會提高洗滌效率；2）按前文建議的HRP標記二抗稀釋度非常重要的。4)將...

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